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HYBRIDATION in situ: VISUALISATION ET QUANTIFICATION DE L'EXPRESSION DE GENES

L’hybridation in situ est une technique qui permet de visualiser la présence d’ADN ou d’ARN spécifiques à l’intérieur d’une cellule ou d’un tissu. Le principe de cette technique est basé sur l’utilisation d’une sonde fluorescente correspondant à une séquence d’acide nucléique spécifique à un gène cible.

L’avantage de cette technologie est de donner une information quantitative et visuelle sur les ARNm étudiés. Elle constitue également une alternative aux expériences d’immunohistochimie ou d’immunofluorescence lorsque aucun anticorps n’est disponible. L’hybridation in situ peut également avoir un intérêt lorsque les échantillons à analyser sont partiellement dégradés ou en trop faible quantité pour permettre une analyse de gènes d’intérêt par RT-qPCR. En effet, l’étape d’extraction d’ARN nécessaire pour des expériences de RT-qPCR peut s’avérer délicate dans ces contextes et résulter en l’obtention d’ARN de mauvaise qualité, difficilement exploitable par la suite.

Bioalternatives propose de vous accompagner dans la mise en oeuvre et l’analyse de vos expériences par hybridation in situ.

hybridation in situ
hybridation in situ hybridation in situ hybridation in situ

Caractéristiques :

  • Bonne sensibilité (détecte une molécule d’ARNm par cellule)
  • Bonne spécificité
  • Faible bruit de fond
  • 3000 sondes disponibles et possibilité de designer des sondes à façon
  • Utilisation jusqu’à 3 sondes différentes dans une même cellule
  • Possibilité de coupler à des expériences d’immunohistofluorescence

Applications :

  • Visualisation de l’expression de gènes
  • Visualisation de la co-expression de miRNA et de leurs gènes cible
  • Visualisation de la cinétique du profil d’expression de gènes
  • Quantification de l’expression de gènes d’intérêt
  • Validation de biomarqueurs dans un type cellulaire donné
  • Validation d’expérience de knock-out

La technologie QuantiGene® de Panomics utilisée à Bioalternatives permet d’analyser jusqu’à 3 sondes différentes dans une même cellule. Le principe de cette technologie est basé sur une méthode d’amplification du signal fluorescent basée sur la technologie bDNA (branched DNA).

L’acquisition des données dans le cadre d’expériences d’hybridation in situ s’effectue à l’aide d’un microscope à fluorescence ou à l’aide d’un système automatisé d’imagerie cellulaire tel que l’INCELL Analyzer.

Vous avez un projet nécessitant des compétences en hybridation in situ ? Parlons-en dès à présent !

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