• Flickr
  • LinkedIn
  • Youtube
SE CONNECTER | CONTACT | +33 (0) 5 49 36 11 37
  • Français
  • English
  • 中文
  • Português
  • 0Panier
Bioalternatives
  • Bioalternatives
    • Qui sommes-nous ?
    • Equipes Bioalternatives
    • Publications
    • Carrières
  • Cosmétique
    • Hydratation et barrière cutanée
    • Régénération épidermique
    • Fermeté et cohésion de la peau
    • Anti-âge et vieillissement cutané
    • Protection et défenses cutanées
    • Pigmentation cutanée
    • Peau grasse et hyperséborrhée
    • Microbiote cutané
    • Amincissants et métabolisme adipocytaire
    • Microcirculation cutanée et vascularisation
    • Repousse des cheveux, alopécie et canitie
  • Dermatologie
    • Acné
    • Alopécie & canitie
    • Cicatrisation
    • Dermatite atopique
    • Psoriasis
    • Microbiote cutané
    • Mélanome
    • Vitiligo (prochainement)
  • Pharmacologie
    • Immuno-Inflammation
    • Neurobiologie
    • Médecine vétérinaire
  • Bioanalyses et bioingénierie
    • Chimie analytique et bioanalyse
      • Bioanalyse d’échantillons cliniques non invasifs
    • Ingénierie cellulaire et tissulaire
    • Screening in silico et profiling phytochimique
      • Screening in silico – SELNERGY
      • Analyse phytochimique et profiling métabolique – GAINS
    • Analyses transcriptomiques
      • Préparation d’ARN et contrôle qualité
      • Rt-qPCR et PCRarrays
      • Microarrays
      • miRNA
      • Hybridation in situ
      • Bioinformatique
    • Services d’histologie
      • Préparation des échantillons et des lames
      • Colorations histologiques
      • Immunomarquages : IF/IHC
      • Microscopie électronique MET/MEB
      • Scanning de lames
    • Développement et validation de tests et protocoles
  • Catalogue
  • Menu Menu

Préparation des échantillons et des lames

Préparation des échantillons et des lames pour observation en microscopie optique

La préparation des échantillons biologiques est une étape capitale de l’observation histologique ou cytologique. Elle permet de mettre en évidence ce que l’on souhaite observer et « d’immobiliser » l’échantillon à un instant t avec des caractéristiques proches de son état vivant. Bioalternatives met en œuvre des protocoles de préparation des échantillons qui garantissent une observation au plus proche de la réalité du vivant.

Vous souhaitez sous traiter une étape ou l’ensemble de la préparation de vos échantillons et lames ? Notre équipe vous accompagne à chaque étape de votre projet, de la fixation au montage des lames. N’hésitez pas à nous contacter.

5 étapes de préparation des échantillons se succèdent :

1. La fixation :

La fixation est réalisée immédiatement après le prélèvement de l’échantillon à observer. Elle permet d’immobiliser et de conserver l’échantillon dans le temps, dans un état proche du vivant. Elle peut être réalisée par un liquide fixateur ou par congélation.

– La fixation en liquide fixateur est réalisée en plongeant le matériel biologique dans une solution de formol.

– La fixation par congélation consiste à plonger l’échantillon dans un milieu de congélation des tissus (liquide à température ambiante et solide à -20°C). Le tout est ensuite refroidi dans de l’azote liquide. L’échantillon congelé est conservé jusqu’à la réalisation des coupes. Cette étape est réalisée dans un moule en respectant l’orientation choisie pour la coupe ultérieure.

2. L’inclusion :

L’inclusion suit la fixation en liquide fixateur. Elle consiste à rigidifier l’échantillon avec un milieu d’inclusion de paraffine, afin de pouvoir procéder à la coupe ultérieure.

Pour cela, il est nécessaire de déshydrater au préalable l’échantillon en remplaçant l’eau qu’il contient par de l’éthanol. L’éthanol est non miscible avec la paraffine, il est donc substitué par une solution (clarifiant) miscible avec la paraffine.

Suite à la clarification, les échantillons sont plongés dans des bains de paraffine. Ces étapes sont réalisées à l’aide d’un automate de déshydratation.

L’étape suivante d’inclusion est réalisée à l’aide d’une table d’inclusion. Elle consiste à orienter l’échantillon dans un moule contenant de la paraffine en fusion, en veillant à respecter le plan de coupe. Le bloc qui en résulte est enfin refroidi.

L’échantillon est ensuite coupé au microtome.

3. La coupe :

Les coupes sont réalisées par microtomie ou cryotomie. La coupe est une étape importante de la préparation des lames car elle conditionne la bonne observation de l’échantillon en microscopie.

– Les échantillons inclus en paraffine sont coupés de façon transversale avec un microtome, en fines tranches de 5 micromètres. Les lames de verre sont recouvertes d’une solution contenant un additif permettant d’optimiser l’accroche de la coupe déposée sur la lame. Les lames sont ensuite placées sur des plaques chauffantes afin d’aider au bon étalement de l’échantillon. Le liquide résiduel est retiré à la main après réchauffement de la lame. Les lames sont ensuite séchées à température ambiante.

– Les échantillons congelés sont coupés à l’aide d’un cryotome. Les coupes à congélation sont ensuite déposées sur une lame de verre pour stockage à -80°C.

Bioalternatives évalue les conditions de fixation et de coupe adaptées à votre échantillon et à votre étude.

Le choix de ces conditions de préparation est capital afin de minimiser les artéfacts. L’inclusion en paraffine est privilégiée pour préserver la morphologie des tissus ; la congélation est plus adaptée pour préserver l’ADN et l’ARN et pour le marquage d’éléments solubles ou sensibles au milieu de fixation.

4. La coloration ou l’immunomarquage :

– La coloration permet d’accentuer les contrastes afin de reconnaître et de différencier des éléments constitutifs du matériel biologique.

L’échantillon est déparaffiné et réhydraté au préalable afin de permettre aux colorants polaires d’imprégner les tissus. Ainsi, les différents colorants peuvent entrer en contact avec les éléments à colorer en fonction de leur affinité.

Une fois la coloration effectuée, la lame est rincée et déshydratée pour le montage.

Nous proposons un large choix de colorations standards et de colorations spéciales. Pour toute demande de coloration spéciale, contactez nos équipes!

Cryostat - Leica CM1850 - Histology
Microtome -Leica RM2235 - Histology
Human skin (Van Gieson staining)
Human skin - involucrine labeling

– L’immunomarquage permet de mettre en évidence des constituants cellulaires et tissulaires  spécifiques (antigènes) grâce à l’utilisation d’anticorps polyclonaux ou monoclonaux.

L’échantillon est mis en présence de la solution contenant l’anticorps puis il est lavé afin de retirer les anticorps non fixés.

Notre équipe peut réaliser des marquages par méthode directe et indirecte en utilisant des anticorps couplés à des fluorochromes (immunofluorescence) ou à des enzymes réagissant avec des chromogènes (immunohistochimie).

Notre laboratoire d’histologie est à votre disposition pour toute demande d’immunomarquages, de recherche et validation d’anticorps et de co-marquage. N’hésitez pas à nous contacter !

5. Le montage :

Les coupes sont montées entre lames et lamelles avec un produit permettant leur adhérence. Les lames sont prêtes à être stockées ou observées.

Pour les observations en microscopie à fluorescence, un milieu de montage est utilisé afin de diminuer temporairement la perte de fluorescence.

Vous avez un projet nécessitant la préparation de lames et d’échantillons ? Parlons-en !

CONTACTEZ NOUS

A lire aussi

3 janvier 2020

Immunomarquages

29 novembre 2019

Scanning de lames

Skin surface with hair_SEMX6000
29 novembre 2019

Microscopie électronique MET/MEB

Herovici staining (x40)
2 juillet 2019

Colorations histologiques

26 juin 2019

Préparation des échantillons et des lames

 

 

BESOIN DE PLUS D’INFORMATIONS ?

  • Ce champ n’est utilisé qu’à des fins de validation et devrait rester inchangé.

Address

Bioalternatives, Inc.
250 Park Avenue, 7th Floor,
New York, NY, 10177, USA
Tel. +1 (212) 364 5115
Mail: info.us[@]bioalternatives.com

Bioalternatives SASU
1bis rue des plantes - CS 50011
86160 Gençay - France
Tel. +33 (0) 5 49 36 11 37
Mail: info[@]bioalternatives.com

Latest posts

  • Effets sur les signes cliniques, les lipides et les facteurs d’hydratation des applications combinées de shampooing et de mousse contenant de l’Ophytrium et du Seboliance chez les chiens atteints de séborrhée
  • Metrology and sensors as dermo-cosmetic technology opportunities for a change of paradigm
  • Évaluation des effets anti-inflammatoires et immunomodulateurs d’un produit sur un modèle in vitro de sang total canin

Cosmétique

  • Hydratation et barrière cutanée
  • Régénération épidermique
  • Fermeté et cohésion de la peau
  • Anti-âge et vieillissement cutané
  • Protection et défenses cutanées
  • Pigmentation cutanée
  • Peau grasse et hyperséborrhée
  • Amincissants et métabolisme adipocytaire
  • Microcirculation cutanée et vascularisation
  • Repousse des cheveux et alopécie

Pharmacologie

  • Immuno-Inflammation
  • Neurobiologie
  • Médecine vétérinaire

Dermatologie

  • Acné
  • Alopécie
  • Cicatrisation
  • Dermatite atopique
  • Psoriasis
  • Mélanome
  • Vitiligo (prochainement)
© Copyright 2019 - Bioalternatives - Mentions légales
  • Flickr
  • LinkedIn
  • Youtube
Faire défiler vers le haut

Mot de passe oublié ?

Mot de passe oublié ? Saisissez votre adresse e-mail. Un lien vous sera envoyé par email afin de rentrer un nouveau mot de passe.

Retour connexion

This site uses cookies only to collect information about how visitors use our site. By continuing to navigate this site, you accept our use of cookies.

OKLearn more

Paramètres de la barre titre



Comment on utilise les cookies

Nous pouvons demander que les cookies soient réglés sur votre appareil. Nous utilisons des cookies pour nous faire savoir quand vous visitez nos sites Web, comment vous interagissez avec nous, pour enrichir votre expérience utilisateur, et pour personnaliser votre relation avec notre site Web.

Cliquez sur les différentes rubriques de la catégorie pour en savoir plus. Vous pouvez également modifier certaines de vos préférences. Notez que le blocage de certains types de cookies peut avoir une incidence sur votre expérience sur nos sites Web et les services que nous sommes en mesure d'offrir.

Cookies Web Essentiels

These cookies are strictly necessary to provide you with services available through our website and to use some of its features.

Because these cookies are strictly necessary to deliver the website, refuseing them will have impact how our site functions. You always can block or delete cookies by changing your browser settings and force blocking all cookies on this website. But this will always prompt you to accept/refuse cookies when revisiting our site.

We fully respect if you want to refuse cookies but to avoid asking you again and again kindly allow us to store a cookie for that. You are free to opt out any time or opt in for other cookies to get a better experience. If you refuse cookies we will remove all set cookies in our domain.

We provide you with a list of stored cookies on your computer in our domain so you can check what we stored. Due to security reasons we are not able to show or modify cookies from other domains. You can check these in your browser security settings.

Code de Suivi Google Analytics

These cookies collect information that is used either in aggregate form to help us understand how our website is being used or how effective our marketing campaigns are, or to help us customize our website and application for you in order to enhance your experience.

If you do not want that we track your visit to our site you can disable tracking in your browser here:

Autres services externes

We also use different external services like Google Webfonts, Google Maps, and external Video providers. Since these providers may collect personal data like your IP address we allow you to block them here. Please be aware that this might heavily reduce the functionality and appearance of our site. Changes will take effect once you reload the page.

Google Webfont Settings:

Google Map Settings:

Google reCaptcha Settings:

Vimeo and Youtube video embeds:

Other cookies

The following cookies are also needed - You can choose if you want to allow them: